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注射進樣量/注射進樣體積
樣品質(zhì)量或體積過載和使用錯誤的樣品溶劑都會造成色譜柱性能的顯著降低，由此損害分離效果。注射進樣體積不得超過流速的10%（比如，在流速為1毫升/分鐘時，注射進樣體積<100微升）。樣品進樣量高出吸附等溫線的線性部分就意味著上樣量過載。這條分界線不一而足，原則上，每毫升柱體積上不得承載超過0.01毫克的樣品（比如，在4.6 X 250 毫米色譜柱上zui大上樣量為22微克）。如果因為檢測精度需要，上樣量還是可以再上調(diào)。樣品溶劑內(nèi)的強移動相組分（反相模式下脂肪醇、乙腈，或者正相模式下脂肪醇、乙酸乙酯等）含量不得超過它們在工作移動相中的濃度。
額外柱體積/死體積
塔板數(shù)低下的原因通常是因為死體積過大。死體積是一下這些部分工作體積的總和，樣品注射器，包括樣品環(huán)，連接注射器和色譜柱的導管，連接色譜柱和貫流分析池的導管，貫流分析池，再加上配件、接頭和線程內(nèi)濾膜所產(chǎn)生的空間。內(nèi)徑為0.010”的導管在液相色譜系統(tǒng)中zui常見。如果使用鉆孔更細（內(nèi)徑<3.0毫米）的色譜柱，可以將內(nèi)徑為0.010”的導管更換成內(nèi)徑為0.007”的導管以減少死體積，從而提高色譜性能。使用內(nèi)徑為0.005”的導管可以進一步減少死體積，但就是操作上不太方便。使用內(nèi)徑小于0.007”的導管對流速有所限制，當緩沖鹽分沉淀析出時會帶來麻煩。如果您正使用多種品牌的液相色譜柱，請確認用以連接色譜柱的配件是否剛好配套。如果您的色譜系統(tǒng)使用的是不銹鋼導管和配件，在連接色譜柱前，請在核對色譜柱的品牌后選擇正確的配件并預先裝配好。如果您的色譜系統(tǒng)使用的是聚醚醚酮材料的導管和配件，比較理想的方式是在每次更換色譜柱的時候，選擇在新切下的聚醚醚酮導管上安裝全新的聚醚醚酮配件，以確保它們之間匹配。
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